Le rôle de la flexibilité de la charnière qui lie les domaines 4 et 5 de la glutamyl-ARNt synthétase d'escherichia coli, sur l'activité catalytique de cette enzyme

Authors: Bonnaure, Guillaume
Advisor: Lapointe, Jacques
Abstract: Les aminoacyl-ARNt synthetases (aaRS) sont des enzymes clés dans le mécanisme de biosynthèse des protéines. Chacun des membres de cette famille d'enzymes reconnaît et lie les éléments d'identités propres à chaque acide ribonucléique de transfert (ARNt) permettant ainsi leur aminoacylation par un acide aminé spécifique. Une fois l'ARNt correctement chargé, celui-ci peut lier un facteur protéique (EF-Tu pour les aminoacyl-ARNt élongateurs) qui le conduit au ribosome pour la biosynthèse des protéines. Plus particulièrement la glutamyl-ARNt synthetase (GluRS) d'Escherichia coli est une protéine capable d'estérifier l'ARNtGIU par un résidu glutamate. Cette enzyme monomérique est subdivisée en 5 domaines structuraux, chacun capable de lier une portion de l'ARNt qui lui est propre. La région formant la boucle d'anticodon de l'ARNtG'u est reconnue par les domaines 4 et 5 séparés par une charnière, et situés en C-terminal de l'enzyme. L'étude d'une GluRS tronquée, délétée de son domaine 5, a montré l'importance de ce domaine sur l'activité catalytique de cette enzyme. Afin de comprendre les mécanismes mis en place entre ces deux derniers domaines lors de la liaison du substrat ARNtGly, des variants protéiques visant à altérer les interactions existant entre les domaines 4 et 5 et la charnière ont été synthétisés, et leur constantes catalytiques mesurées. L'étude du simple variant, substitué au niveau du second résidu chargé de la charnière de la GluRS de E. coli a montré l'importance de ce dernier dans les interactions mises en place entre le domaine 5 et la charnière. Par ailleurs l'altération des constantes cinétiques (en comparaison avec les valeurs trouvées pour l'enzyme sauvage), de double et triple variants, substitués au niveau des résidus chargés trouvés sur la charnière séparant les domaines 4 et 5, ont révélé l'importance de certain de ces résidus dans les interactions existant entre ces deux domaines.
Document Type: Mémoire de maîtrise
Issue Date: 2012
Open Access Date: 18 April 2018
Permalink: http://hdl.handle.net/20.500.11794/23327
Grantor: Université Laval
Collection:Thèses et mémoires

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