Étude structure/fonction de l'endopeptidase YPS1 de la levure S. cerevisiae

Authors: Dubé, Alexandre
Advisor: Bourbonnais, Yves
Other Title(s): Étude structure / fonction de l'endopeptidase YPS1 de la levure S. cerevisiae
Abstract: Le transport des protéines dans la voie de sécrétion est un phénomène hautement régulé. Pour les protéines GPI (glycosylphosphatidylinositol), une étude menée avec Gaslp a démontré que ce type de protéines bourgeonnait à un endroit spécifique du reticulum endoplasmique (RE). De plus, une étude antérieure avait permis d'établir la présence de deux types de vésicules de sécrétion qui peuvent fusionner avec la membrane plasmique, les HDSV (High density secretory vesicle) (contenant des protéines solubles et membranaires) et les LDSV (Low density secretory vesicle) (contenant des protéines GPI), sans décrire leurs provenances. Dernièrement, une étude de Gagnon-Arsenault et al., menée avec différentes formes de Ypslp, a montré qu'une forme tronquée de Ypslp est susceptible au clivage par Kex2p, une endopetidase résidante du réseau trans-golgien (TGN), mais non la forme sauvage ayant un GPI. Puisque ces deux formes étaient maturées différement, nous avons décidé d'étudier le transport des protéines GPI. Pour se faire, nous avons utilisé Ypslp comme protéine modèle. Nous avons débuté l'étude par la création et la caractérisation d'un mutant simplifiant l'analyse de Ypslp. Par la suite, nous avons analysé l'effet de l'endopeptidase Kex2 sur ce mutant en fonction de son ancrage. Pour terminer, nous avons analysé la sécrétion de deux substrats de Ypslp dans la banque de deletion de S. cerevisiae. Nous avons démontré, grâce à notre mutant, que l'accès au site actif de Ypslp était régulé par la boucle d'insertion. Cette régulation peut être affectée en diminuant la glycosylation sur les substrats de Ypslp. Pour notre objectif principal qui était d'analyser le transport des protéines GPI, nous n'avons pu discrimer entre un évitement du TGN ou une ségrégation latérale à l'intérieur du TGN. Nous avons toutefois appuyé les résultats de Gagnon-Arsenault et al, comme quoi la forme tronquée est susceptible à un clivage Kex2p-dépendant ce qui n'est par le cas de la forme GPI. Nous avons également observé le même phénomène que pour la forme tronquée, mais cette fois avec une forme ancrée aux membranes par un domaine transmembranaire exclu des radeaux lipidiques. Le dernier objectif de cette étude, le criblage de la banque de deletion, nous a permis d'identifier 5 mutants affectant la stabilité des protéines GPI avec la membrane plasmique. De ce groupe, trois sont connues pour jouer un rôle dans le remodelage de l'ancrage GPI.
Document Type: Mémoire de maîtrise
Issue Date: 2011
Open Access Date: 18 April 2018
Permalink: http://hdl.handle.net/20.500.11794/23081
Grantor: Université Laval
Collection:Thèses et mémoires

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