Optimisation d'un test d'inhibition de l'enzime de conversion de l'angiotensine-1

Abstract

L'enzyme de conversion de l'angiotensine-I (ECA) catalyse l'hydrolyse de l'angiotensine-I en angiotensine-II, un puissant vasoconstricteur des artérioles qui induit alors une augmentation de la pression sanguine. Des inhibiteurs de l'ECA sont donc utilisés aujourd'hui pour le traitement de l'hypertension, le Captopril étant le médicament le plus connu. D'autre part, plusieurs peptides inhibiteurs de l'ECA ont été identifiés dans les protéines alimentaires, notamment dans les protéines du lait. Ce domaine de recherche est donc fort actif puisque les inhibiteurs de l'ECA de source naturelle, bien que moins actifs que les médicaments, ne semblent pas causer d'effets secondaires. Pour mesurer l'activité inhibitrice de ce type de peptides, plusieurs méthodes de mesure de l'activité de l'ECA ont été développées dont la plus ancienne est celle de Cushman et Cheung (1971). Toutefois, cette méthode comporte plusieurs étapes fastidieuses, incluant une extraction à l'acétate d'éthyle, et utilise une quantité importante de produits dispendieux. L'objectif de ce projet de recherche était donc d'évaluer l'efficacité de différentes méthodes d'évaluation de l'activité de l'ECA en vue de mettre au point une méthode précise et répétable, idéalement réalisable en microplaques de manière à utiliser un minimum de produits et être en mesure d'analyser plusieurs échantillons en une seule étape. La nouvelle méthode développée dans le cadre de ce projet est basée sur l'utilisation du substrat FaPGG [N-(3-(2-Furyl)Acroloyl)-PHE-GLY-GLY] dans un volume réactionnel total de 225 [mu]L, permettant ainsi d'analyser 96 échantillons en une seule étape dans une microplaque avec un temps d'analyse de 10 minutes. Avec cette méthode, la valeur IC₅₀ du Captopril est de 8,35 nM avec un coefficient de détermination (R²) de 0,98. Aussi, la valeur IC₅₀ du peptide β-Lg fl42-148, issu de la β-lactoglobuline et reconnu pour son activité antihypertensive, est de 142,19 [mu]M (±18,73)