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Simultaneous isolation of keratinocytes and fibroblasts from a human cutaneous biopsy for the production of autologous reconstructed skin

The key step In the reconstruction of skin by the self-assembly approach is to use fibroblasts capable of secreting a mature extracellular matrix and keratinocytes that can associate with one another to form a stratified, differentiated epidermis. To determine the most efficient way to extract both cell types from a single cutaneous biopsy, five different enzymatic combinations were tested. The yield, viability and morphology of the recuperated cells were compared. The length and temperature of the enzymatic treatments influenced the number and the type of cells recuperated. The cells were then cultured in appropriate media in monolayers and reconstructed skin were produced using the self-assembly approach. No difference was observed between the different strains of cells.

La réussite de la technique d'auto-assemblage pour la reconstruction de la peau dépend de la capacité des fibroblastes à sécréter une matrice extracellulaire complexe ainsi que celle des kératinocytes à s'associer pour former un épiderme stratifié et différencié. Pour déterminer la manière la plus efficace d'extraire ces deux types cellulaires d'une seule biopsie cutané, cinq combinaisons d'enzymes ont été comparées. La durée et la température des traitements enzymatiques ont influencé le nombre de cellule récupérés. Les cellules ont d'abord été cultivées en monouche, puis peaux reconstruites par la méthode d'auto-assemblage ont été produites. Aucune différence n'a été observée entre les différentes Iignées.