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Personne :
Gaillet, Bruno

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Gaillet

Prénom

Bruno

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Université Laval. Département de génie chimique

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ncf11859712

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Voici les éléments 1 - 2 sur 2
  • PublicationAccès libre
    Utilisation de vecteurs viraux et du système inductible au cumate pour la production de protéines recombinantes avec les cellules CHO
    (2010) Gaillet, Bruno; Garnier, Alain; Massie, Bernard
    Aujourd'hui, la production de protéines thérapeutiques est effectuée principalement à partir de lignées de cellules d'ovaires de hamster chinois CHO. Ces cellules, contrairement aux systèmes bactériens et certains systèmes eucaryotes, sont capables d'effectuer toutes les modifications post traductionnelles nécessaires à la fonctionnalité de la protéine. Avec plusieurs centaines de protéines actuellement en essais précliniques, il est nécessaire de développer des méthodes de production de glycoprotéines efficaces et rapides dans les cellules CHO. Au cours de cette thèse deux nouveaux systèmes d'expression performants de protéines recombinantes dans les cellules CHO sont présentés. Ces systèmes reposent sur l'utilisation d'un virus épisomal (adenovirals) ou intégratif (lentivirus) comme vecteur de transfert et du système inductible au cumate pour le contrôle de l'expression des transgènes. Dans ce système inductible, la transcription débute lorsque le transactivateur au cumate (cTA) ou le transactivateur inverse au cumate (rcTA) se lie sur le promoteur inductible au cumate CR5. En présence de cumate, la liaison du cTA sur le promoteur CR5 est inhibée empêchant la transcription contrairement au rcTA dont la liaison avec le promoteur CR5 est possible seulement en présence de cumate. La première méthode consiste à infecter des cellules CHO exprimant le cTA (CHO-cTA) et le récepteur du coxackievirus et de 1'adenovirus (CAR) par un adenovirus de type 5 exprimant le transgène de la protéine d'intérêt dans ce cas-ci celui de l'alcaline phosphatase sécrétée (SEAP) sous le contrôle du promoteur CR5. Cette technique permet de produire à 30°C six jours suivant l'infection jusqu'à 63 ug/mL de SEAP dans des conditions de culture non optimisées. Des lentivirus ont également été utilisés pour l'expression stable de différents transgènes dans les cellules CHO exprimant le cTA ou le rcTA. Des lots de clones CHO ont été générés produisant à 30°C jusqu'à 65 ug/mL de SEAP dans les cellules CHO-cTA et 235 ug/mL d'une protéine de fusion CD200Fc, 160 ug/mL d'anticorps chimérique chB43 et 206 ug/mL d'érytliropoïétine EPO dans les cellules CHO-rcTA, sous des conditions de culture non optimisées. Ces résultats démontrent que l'utilisation de virus couplé à un système de contrôle performant de l'expression de transgènes permet de produire rapidement et en quantité importante une gamme variée de protéines thérapeutiques dans les cellules CHO.
  • PublicationAccès libre
    Dynamics of endothelial cell responses to laminar shear stress on surfaces functionalized with fibronectin-derived peptides
    (American Chemical Society, 2018-10-11) Duchesne, Carl; Ruel, Jean; Tremblay, Catherine; Juneau, Pierre-Marc; Beland, Ariane V.; Garnier, Alain; Ling, Si Da; Boulanger, Mariève D.; Laroche, Gaétan; Hoesli, Corinne A.; Gaillet, Bruno
    Surface endothelialization could improve the long-term performance of vascular grafts and stents. We previously demonstrated that aerosol-generated fibronectin-derived peptide micropatterns consisting of GRGDS spots over a WQPPRARI background increase endothelial cell yields in static cultures. We developed a novel fluorophore-tagged RGD peptide (RGD-TAMRA) to visualize cell–surface interactions in real-time. Here, we studied the dynamics of endothelial cell response to laminar flow on these peptide-functionalized surfaces. Endothelial cells were exposed to 22 dyn/cm² wall shear stress while acquiring time-lapse images. Cell surface coverage and cell alignment were quantified by undecimated wavelet transform multivariate image analysis. Similar to gelatin-coated surfaces, surfaces with uniform RGD-TAMRA distribution led to cell retention and rapid cell alignment (∼63% of the final cell alignment was reached within 1.5 h), contrary to the micropatterned surfaces. The RGD-TAMRA peptide is a promising candidate for endothelial cell retention under flow, and the spray-based micropatterned surfaces are more promising for static cultures.