Personne : Bisson, Francis
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Nom de famille
Bisson
Prénom
Francis
Affiliation
Faculté de médecine, Université Laval
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ORCID
Identifiant Canadiana
ncf11862947
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Voici les éléments 1 - 2 sur 2
Publication Accès libre Effets de couches nourricières murines et humaines sur la préservation des capacités prolifératrices des cellules épithéliales humaines cultivées in vitro(2012) Bisson, Francis; Germain, LucieLes feuillets de cellules épidermiques cultivés en laboratoire sont des substituts cutanés pour le traitement des grands brûlés. Notre équipe a démontré que la couche nourricière de fibrobiastes (CNF) murine accroît la survie des kératinocytes (cellules épidermiques) humains en y maintenant l'expression du facteur de transcription Spl. Notre hypothèse est que l'utilisation d'une CNF irradiée accroit la survie des cellules souches épithéliales cutanées en culture, ce qui permet d'augmenter le potentiel de prolifération et de retarder la différenciation des kératinocytes en culture. Le but de ce projet est d'analyser l'effet des CNF d'origine humaine sur la prolifération et la différenciation des kératinocytes et de comprendre les mécanismes par lesquels Spl influence la survie de ces cellules, notamment en évaluant la régulation de la transcriptase inverse de la télomérase (hTERT). Des kératinocytes ont été cultivés sur une CNF humaine ou murine irradiées ainsi que sans CNF pendant une vingtaine de passages ou jusqu'à différenciation terminale. Des extraits de protéines, d'ARN et de cellules ont été prélevés à chaque passage. Le niveau d'expression de la protéine Spl ainsi que l'activité de la télomérase ont été analysés en fonction des passages. Les résultats obtenus montrent que la CNF humaine possède des caractéristiques similaires à la CNF murine tel que vérifié par le nombre de passages atteints avant différenciation ainsi que par l'expression du facteur de transcription Spl. De plus, il existe une forte corrélation entre l'expression de Spl et le taux de croissance des cellules, ce qui suggère un mécanisme par lequel Spl aiderait la prolifération des kératinocytes. Sans couche nourricière, l'activité de la télomérase et l'expression de Spl sont nettement diminuées. Par contre, les CNF humaines permettent une bonne prolifération des kératinocytes ainsi que le maintien de l'expression de Spl et de l'activité de la télomérase. En conclusion, nos résultats suggèrent que la survie des cellules épithéliales souches en culture passe par des mécanismes moléculaires impliquant Spl et le maintien de l'activité de la télomérase.Publication Accès libre Irradiated human dermal fibroblasts are as efficient as mouse fibroblasts as a feeder layer to improve human epidermal cell culture lifespan(Molecular Diversity Preservation International, 2013-02-26) Guérin, Sylvain; Germain, Lucie; Larouche, Danielle; Bisson, Francis; Rochefort, Éloise; Zaniolo, Karine; Damour, Odile; Auger, François A.; Simard-Bisson, Carolyne; Lavoie, AmélieA fibroblast feeder layer is currently the best option for large scale expansion of autologous skin keratinocytes that are to be used for the treatment of severely burned patients. In a clinical context, using a human rather than a mouse feeder layer is desirable to reduce the risk of introducing animal antigens and unknown viruses. This study was designed to evaluate if irradiated human fibroblasts can be used in keratinocyte cultures without affecting their morphological and physiological properties. Keratinocytes were grown either with or without a feeder layer in serum-containing medium. Our results showed that keratinocytes grown either on an irradiated human feeder layer or irradiated 3T3 cells (i3T3) can be cultured for a comparable number of passages. The average epithelial cell size and morphology were also similar. On the other hand, keratinocytes grown without a feeder layer showed heavily bloated cells at early passages and stop proliferating after only a few passages. On the molecular aspect, the expression level of the transcription factor Sp1, a useful marker of keratinocytes lifespan, was maintained and stabilized for a high number of passages in keratinocytes grown with feeder layers whereas Sp1 expression dropped quickly without a feeder layer. Furthermore, gene profiling on microarrays identified potential target genes whose expression is differentially regulated in the absence or presence of an i3T3 feeder layer and which may contribute at preserving the growth characteristics of these cells. Irradiated human dermal fibroblasts therefore provide a good human feeder layer for an effective expansion of keratinocytes in vitro that are to be used for clinical purposes.