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Personne :
Gagnon, Camille

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Nom de famille

Gagnon

Prénom

Camille

Affiliation

Université Laval. Département de biochimie, de microbiologie et de bio-informatique

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Identifiant Canadiana

ncf13725453

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Résultats de recherche

Voici les éléments 1 - 1 sur 1
  • PublicationAccès libre
    Surexpression, purification et caractérisation des sous-unités GBt et GYt individuelles et formation de l'hétérodimère GBYt de la transducine
    (2023) Gagnon, Camille; Salesse, Christian
    La transducine est une protéine G, composée de trois sous-unités (alpha, $G_α$t; bêta, $G_β$t; gamma, $G_γ$t). La liaison entre la rhodopsine et la $G_{αβγ}$t provoque l'échange du GDP pour le GTP au niveau de la sous-unité $G_α$t, résultant en la dissociation entre les sous-unités $G_α$t et $G_{βγ}$t. Ce projet de recherche est centré sur l'étude des sous-unités $G_β$t et $G_γ$t et du complexe formé par ces deux sous-unités ($G_{βγ}$t), afin de déterminer la stabilité de leur structure individuelle ainsi que celle de l'hétérodimère $G_{βγ}$t. La sous-unité $G_γ$t a été surexprimée dans E. coli en fusion avec deux étiquettes de purification et a ensuite été purifiée par chromatographie d'affinité. L'ADN de la sous-unité $G_β$t a été synthétisé commercialement, individuellement et en fusion avec des étiquettes. Des essais de surexpression de la sous-unité $G_β$t ont été faits dans divers types de cellules hôtes. Toutefois, de faibles quantités de la sous-unité $G_β$t ont été obtenues sous une forme soluble, nécessitant l'utilisation du détergent dodécylsulfate de sodium (SDS) pour optimiser sa production. La sous-unité $G_β$t a ensuite été purifiée en utilisant le même protocole que dans le cas de la sous-unité $G_γ$t. Des travaux ont été faits pour reconstituer l'hétérodimère $G_{βγ}$t en procédant au mélange équimolaire de la sous-unité $G_γ$t purifiée et de la protéine de fusion de la $G_β$t purifiée avec ses étiquettes. Des mesures additionnelles de chromatographie d'exclusion de taille et d'immunobuvardage de type western seront nécessaires pour confirmer la formation de l'hétérodimère $G_{βγ}$t. Des segments externes des bâtonnets ont été purifiés à partir d'yeux bovins afin de purifier la forme farnésylée des sous-unités $G_{βγ}$t pour comparer ses propriétés avec celles de l'hétérodimère $G_{βγ}$t reconstitué. Finalement, ces travaux ont permis de mettre au point un protocole afin de surexprimer et de purifier les sous-unités $G_β$t et $G_γ$t ainsi que pour tenter de former l'hétérodimère $G_{βγ}$t,