Personne : Gagnon, Camille
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Adresse électronique
Date de naissance
Projets de recherche
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Fonction
Nom de famille
Gagnon
Prénom
Camille
Affiliation
Université Laval. Département de biochimie, de microbiologie et de bio-informatique
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Identifiant Canadiana
ncf13725453
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Voici les éléments 1 - 1 sur 1
- PublicationAccès libreSurexpression, purification et caractérisation des sous-unités GBt et GYt individuelles et formation de l'hétérodimère GBYt de la transducine(2023) Gagnon, Camille; Salesse, ChristianLa transducine est une protéine G, composée de trois sous-unités (alpha, G[indice α]t; bêta, G[indice β]t; gamma, G[indice γ]t). La liaison entre la rhodopsine et la G[indice αβγ]t provoque l'échange du GDP pour le GTP au niveau de la sous-unité G[indice α]t, résultant en la dissociation entre les sous-unités G[indice α]t et G[indice βγ]t. Ce projet de recherche est centré sur l'étude des sous-unités G[indice β]t et G[indice γ]t et du complexe formé par ces deux sous-unités (G[indice βγ]t), afin de déterminer la stabilité de leur structure individuelle ainsi que celle de l'hétérodimère G[indice βγ]t. La sous-unité G[indice γ]t a été surexprimée dans E. coli en fusion avec deux étiquettes de purification et a ensuite été purifiée par chromatographie d'affinité. L'ADN de la sous-unité G[indice β]t a été synthétisé commercialement, individuellement et en fusion avec des étiquettes. Des essais de surexpression de la sous-unité G[indice β]t ont été faits dans divers types de cellules hôtes. Toutefois, de faibles quantités de la sous-unité G[indice β]t ont été obtenues sous une forme soluble, nécessitant l'utilisation du détergent dodécylsulfate de sodium (SDS) pour optimiser sa production. La sous-unité G[indice β]t a ensuite été purifiée en utilisant le même protocole que dans le cas de la sous-unité G[indice γ]t. Des travaux ont été faits pour reconstituer l'hétérodimère G[indice βγ]t en procédant au mélange équimolaire de la sous-unité G[indice γ]t purifiée et de la protéine de fusion de la G[indice β]t purifiée avec ses étiquettes. Des mesures additionnelles de chromatographie d'exclusion de taille et d'immunobuvardage de type western seront nécessaires pour confirmer la formation de l'hétérodimère G[indice βγ]t. Des segments externes des bâtonnets ont été purifiés à partir d'yeux bovins afin de purifier la forme farnésylée des sous-unités G[indice βγ]t pour comparer ses propriétés avec celles de l'hétérodimère G[indice βγ]t reconstitué. Finalement, ces travaux ont permis de mettre au point un protocole afin de surexprimer et de purifier les sous-unités G[indice β]t et G[indice γ]t ainsi que pour tenter de former l'hétérodimère G[indice βγ]t,